用于沙门氏菌超快速目视检测的单管分析
发布时间：2024-06-21 浏览次数：58
沙门氏菌是引起食源性疾病的重要病原菌之一。据统计在世界各国的种类细菌性食物中毒中，沙门氏菌引起的食物中毒常列榜首。我国内陆地区也以沙门氏菌为首位。当沙门氏球菌侵入人体后，人们可能会在12-72小时内出现腹泻、腹痛、呕吐、发烧，偶尔还会死亡。因此，做好对沙门氏菌的检测，防止“病从口入”还是非常重要的。
什么是沙门氏菌？
沙门氏菌是沙门氏菌病的病原体。属肠杆菌科，革兰氏阴性肠道杆菌。在水中不易繁殖，但可生存2-3周，冰箱中可生存3-4个月，在自然环境的粪便中可存活1-2个月。沙门氏菌很容易污染肉类、蛋类和乳制品等食品以及蔬菜和水果的表面。人们可能会在摄入受污染的食物后12-72小时内出现腹泻、腹痛、呕吐、发烧，偶尔还会死亡。因此，该菌的存在严重影响食品安全，对消费者健康构成威胁。因此，快速检测食品中的沙门氏菌对食品安全和人体健康至关重要。
怎么检测沙门氏菌？
迄今为止，培养法、酶联免疫吸附法、分子生物学检测等方法主要用于不同基质中食源性致病菌的检测。传统的基于培养的沙门氏菌检测方法耗时，通常需要2-5天。核酸聚合酶链式反应(PCR)的实时荧光扩增检测在病原体诊断中表现出优异的性能。然而，PCR需要1.5—2小时才能实现温度上升和冷却，这很难用于需要快速读取结果的现场检测场景。因此，建立一种灵敏快速的沙门氏菌检测方法显得尤为重要。
在本文中，作者建立了一种本研究建立了基于CDE的单管AC-PCR方案。该方案集成了原位DNA提取，扩增，和可视化的超快速检测沙门氏菌。壳聚糖在pH = 5.0时带正电荷，可通过静电相互作用有效提取沙门氏菌DNA。为了简化提取步骤，本文的单管方案利用壳聚糖功能化DE的自沉淀特性，在3 min内实现无离心提取。
图 1 检测原理图
结论：本文的方案可以直接从生物样品中提取DNA，避免了大量的结合、洗涤、硅基柱洗脱等耗时的操作和试剂浪费。基于CDE的单管方案不仅克服了传统核酸提取方法的许多固有问题，而且将后续扩增方法的检出限降低了100倍。基于CDE的单管AC-PCR方案满足沙门氏菌检测的所有主要要求，包括无扩增干扰、核酸富集能力强、灵敏度高。该系统在人工感染样本的检测中也表现出了优异的性能，可以很容易、直观地区分阳性和阴性样本，该系统将为食源性病原体检测和福利点检测(POCT)提供新的线索。
参考文献：Zhao X, Wan Q, Zhang J, Duan Y, Li Y, Ma J, Shi C, Ma C. Single-tube analysis for ultra-fast and visual detection of Salmonella. Anal Bioanal Chem. 2022 Mar;414(7):2333-2341. doi: 10.1007/s00216-022-03904-z. Epub 2022 Jan 25. PMID: 35079852; PMCID: PMC8788404.
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