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实验室微生物检测过程注意事项

发布时间:2019-11-29    浏览次数:124

一、培养基的灭菌及使用

(1)每次进行培养基配置时,要注意其生产日期是否在保质期内,查看其开瓶日期及瓶口密封性,保证其未变质,并且未吸潮。

(2)培养基配置时,称量要准确,包括盐水的分装要准确。

(3)一定要保证现配制现灭菌,未灭菌的配好培养基不能长时间放置,更不可隔夜。

(4)培养基灭菌时要保证恒温、恒压,同时要保证有效灭菌时间。

(5)灭菌过的培养基要冰箱保存,可保存一周,一般不超过 3 天。而且要遵循“先入先出”原则,先配制的培养基要先使用。

(6)在使用时,要根据当班次的使用量,用水浴锅先将培养基溶化为液态,然后及时调低水域温度(先化好的可从水域取出,放在水浴锅锅盖上)待用,千万不可长时间使培养基处于高温状态。

(7)做产品微生物检测时,倾倒培养基温度在 45℃左右,不可过烫,避免将菌烫死;也不可过凉,化好的培养基又结块凝固,不便于观察结果。

(8)每瓶培养基均要做空白。

(9)尽量集中做样,避免频繁打开同一瓶培养基瓶塞,增大培养基的污染几率,出现误差结果。

(10)培养基剩余过少时,可先将其倾倒成空白用板。

二、 做样环境的维持

(1)大环境(房间)

1)微生物检测做样时,窗户和空调要关闭,或用酒精对房间进行喷雾消毒,避免房间内空气流通影响安全柜内部环境(最好在有通排风系统的恒温恒湿无菌间进行操作)。

2)如果在原来的原料微生物检测室进行做样,要定期开启紫外灯,对房间进行杀菌。

(2)小环境(生物安全柜)

1)工作前准备

a. 首先微生物检测实验室生物安全柜打开紫外灯照射30分钟

b. 关紫外灯,打开生物安全安全柜的日光灯和风机,用消毒剂对生物安全柜的内表面进行消毒擦拭

c. 将实验中需要用到的物品集中用消毒剂擦拭后放在台面相应位置上(切记勿阻挡风口!)

d. 等待5min,净化工作区的空气污染物

2)操作规范

a. 微生物检测实验过程中,双臂垂直缓慢进入前面的开口,在生物安全柜中等待大约一分钟,以使安全柜调整完毕后才可对物品进行处理。

b. 所有操作应在离前窗10cm以外的工作区进行。

c. 废弃物应丢弃在生物安全柜内的处理容器中。

3)微生物检测实验操作时注意事项

a. 双避免胳膊在前开口处快速移动和频繁进出

b. 尽量避免污染的物品进入洁净区

c. 避免使用明火干扰气流,可使用微型电加热器,最好使用一次性接种环。

d. 在生物安全柜内进行操作时,不能进行文字工作

e. 尽量减少操作者身后的人员活动。

4)工作结束后的要求

a. 将生物安全柜继续运行至少3min来完成“净化”过程

b. 将柜内物品移出前,应使用有效的消毒剂擦拭(特别是霉菌)

c. 每天实验结束后,对生物安全柜的内壁和台面进行擦拭

d. 等待5分钟后,关闭前窗,关灯,关风机,紫外灯照射30分钟

三、 工器具的洁净度

(1)玻璃器皿:采用干热灭菌方式进行灭菌。

(2)做样用剪刀、勺子等物品要做到做样专用,不可与其它操作器具混用,使用时,先用75%酒精消毒,再采用灼烧方式进行灭菌。

(3)接种针(环)采用灼烧方式进行灭菌,但要注意做样时要先将接种针(环)进行冷却。

四、样品的采集及微生物检测

(1)保证采样器具的无菌性

1)玻璃器皿:采用干热灭菌方式进行灭菌,保证恒温、时间足够(但不可时间过长,导致玻璃器皿易裂纹而报废)。

2)取样筐:使用前要用75%酒精进行喷洒消毒。

3)取样勺:要保证其清洁消毒,清洁后用75%酒精进行擦拭消毒。

4)取样袋:可先用酒精进行擦拭消毒,再在安全柜用紫外灯照射消毒,(包装车间要在传递窗用紫外灯照射消毒)。

5)电子称表面用 75%酒精消毒。

(2)人员操作

1)保证手部的清洗、消毒:取样前及做样前都要先洗手再消毒。

2)取样要具有代表性(随机样、目的样、综合样)且要标示清楚。

3)取样完毕,不可在车间逗留,要及时将样品放入安全柜,对其外表面进行紫外灯照射消毒。

4)在要求的做样区域进行操作。

5)做样前,要用 75%酒精棉球对样品袋口部进行擦拭消毒,再开口。

6)往盐水瓶加样品时,要注意勺子或袋子尽量不接触瓶口。

7)样品计量要准确,稀释倍数也要准确(1mL 吸管不允许将管口敲掉),进行 100 倍稀释时,1mL 吸管要伸入盐水中,不可以将样品从管壁流下去,同时要避免将管底部捅破。

8)盐水温度以 40℃左右为宜,不能过热,会将部分微生物烫死;也不能温度太低,不能将样品溶解完全。

9)进行稀释时,要摇匀,保证溶液的均一性。

10)倾倒平皿时,要注意培养基瓶口不要接触到平皿;倾倒的培养基要适量,不可以太少,在培养过程中干掉,微生物亦死亡,以 15mL 左右为宜。

11)做大肠菌群样时,要提前将乳糖胆盐培养基培养管按需要量备好,放入安全柜对外表面进行紫外线灭菌。

12)接二步时,要注意先将接种针(环)进行冷却,避免出现接不上菌落的情况发生,导致无法判断、确认。

13)做样完毕,及时放入相应培养箱进行培养,并清理清洁安全柜。

五、 微生物的培养

(1)在培养过程中,要随时监控培养箱温度,保证其在适宜的温度进行培养。

(2)要按照《微生物检验规范》要求及时观察结果,出现异常,要及时分析原因进行反馈。