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实验室微生物检验注意事项

发布时间:2019-09-12    浏览次数:247

一、微生物实验室注意事项

1、工作室要矮小平整、光滑、无凹凸不平或棱角、四壁及屋顶用不透水之材质,便于擦洗及杀菌。

2、室内采光面积应大,从室外应能看到室内的情况。

3、为保证无菌室的洁净,无菌室周围需设缓冲走廊,走廊旁再设缓冲间,其面积可小于无菌室。

4、无菌室、缓冲走廊及缓冲间均设有日光灯及紫外灯,杀菌紫外灯离工作台以一米为宜,其电源开关应设在室外。

5、无菌室与缓冲间进出口应设推拉门,门与窗平齐,门缝要封紧,两门要错开,以免空气对流造成污染。

二、使用无菌室注意事项

1、无菌室要保持清洁整齐,室内仅存放最必须的检验用品,如:酒精灯、酒精棉、火柴、镊子、接种针、接种环、记号笔等。

2、室内检验用具及桌凳应保持固定位置,不随便移动。

3、每2周用2%消毒液(二氧化氯等)水溶液擦拭工作台、门、窗、桌凳及地面,然后用二氧化氯溶液喷雾消毒空气或过氧乙酸熏蒸,最后紫外灯杀菌。

4、定期检查室内空气无菌状态,进行细菌和霉菌的检查。洁净区沉降菌及浮游菌监测可采用环凯三层无菌包装系列培养基(TSA、SDA、营养琼脂)及浮游菌采样器。

5、无菌室杀菌前应将所有物品置于操作之部位,然后打开紫外灯杀菌半小时,时间一到,关闭紫外灯待用。

6、操作应严格按照无菌操作规定进行,操作少说话,不喧哗,以保持环境的无菌状态。

三、配制培养基注意事项

1、灭菌时严格按照规定加热、加压,切忌时间过长压力过高,否则会造成营养成分的破坏。

2、切忌使用铜锅、铁锅配制培养基。

3、培养基不能二次高压灭菌。

四、无菌操作注意事项

1、进入无菌室之前先进行空气消毒,工作人员进入无菌室以前,必须于缓冲间更换消毒过的工作服、工作帽及工作鞋。

2、动作要轻,尽量减少走动,以免搅动空气。

3、操作要靠近酒精灯火焰区,使用吸管要用吸球。

4、接种环/接种针用前用后进行火焰灭菌。

5、工作结束做好终末消毒,所有带菌培养物均应高压灭菌后再扔掉,以免污染环境。

五、菌落总数测定注意事项

1、选取样品要有代表性,如为固体样品要多采几个部位,液体检样要混匀。

2、每次做样从开始到结束都要进行超净台空气净度的监测,同时对所有灭菌物品做空白对照。

3、为减少稀释倍数的误差,在做连续递增稀释时,每一稀释液应充分振摇使其均匀,同时每一稀释度换一支吸管。

4、在进行连续稀释时,应将吸管内液体沿壁流入,勿使吸管尖端触及稀释液。

5、倾倒营养琼脂培养基平板时,温度要在46±10之间,数量要在15ml左右为宜,不要太多太少。

6、培养物48h培养后培养基失重不宜超过15%。

7、检样加入平皿后应立即倾注培养基并旋转混匀,一般从稀释到倾注不超过20分钟。

8、平皿内如有链状菌落生长时:菌落之间无明显界限且仅有一条链可视为一个菌落,如为不同来源的几条链则将每条链各做一个菌落记。

9、做菌落记数时平板里所有的菌落都要记数。

六、大肠菌群注意事项

1、对乳糖胆盐管产气的观察只要有气泡往上冒就算产气。

2、在伊红美兰琼脂平板上挑取菌落时一定要选典型菌落。

七、霉菌、酵母菌检验注意事项

1、稀释样品时用无菌水。

2、3天观察时把所有的酵母菌做标记。

3、如果有霉菌被培养出,请不要把皿盖随便打开,待培养物高压灭菌后再清洗。

八、坏包分析注意事项

1、对已开包的酸包胀包要马上转移到无菌瓶中,以防二次污染。

2、根据坏包的不同表现状态适当的选择培养项目。

3、做微生物培养的同时测定感官、理化指标,注意其有何变化。

九、商业无菌注意事项

1、要求有厌氧培养的一定要在厌氧环境下培养。

2、取样测pH值,要与同批正常样相比,看是否有显著差异。

3、对pH 值有可疑的样品都要做涂片染色镜检,与同批正常样相比,看是否有明显的微生物增殖现象。

4、保温期间出现的胀包,漏包、或开包发现pH、感官异常、腐败变质,进一步镜检发现有异常数量细菌的样品均应进行划线培养。